PCR檢測是一種分子生物學技術,全稱為聚合酶鏈式反應Polymerase Chain Reaction,主要用于擴增特定DNA片段。該技術通過模擬DNA自然復制過程,在體外快速合成目標基因序列,具有高靈敏度、高特異性和高效率的特點。
PCR檢測的核心步驟包括變性、退火和延伸三個循環(huán)階段。在95℃高溫下,雙鏈DNA解旋為單鏈;隨后降溫至50-65℃,引物與目標序列特異性結合;最后在72℃條件下,DNA聚合酶沿模板合成新鏈。經過30-40次循環(huán)后,目標DNA片段可擴增數百萬倍。
該技術主要應用于病原體檢測如新冠病毒、乙肝病毒、遺傳病診斷、親子鑒定、法醫(yī)物證分析等領域。在傳染病防控中,實時熒光定量PCRqPCR能同步完成擴增和檢測,通過熒光信號變化實現病原體核酸的定量分析,檢測限可達1-10拷貝/毫升。
樣本類型包括咽拭子、血液、組織等,檢測時長通常為2-4小時。需在生物安全二級實驗室進行操作,防止氣溶膠污染。假陰性結果可能源于樣本采集不當、病毒變異或抑制劑存在,假陽性多由實驗室污染導致。
特殊情況下需采用數字PCRdPCR或逆轉錄PCRRT-PCR等衍生技術。目前PCR技術已發(fā)展至第三代,如微流控芯片PCR可在30分鐘內完成檢測。該技術仍是分子診斷的金標準,但需結合臨床癥狀和其他檢查綜合判斷。